Estudo de mutantes de citoglobina nos resíduos de tirosina e triptofano e influenciada por peptídeos sintéticos: Contribuição para a compreensão do mecanismo de peroxidase da hemoproteína

Nome do Pesquisador: Iseli Lourenço Nantes

Agência de fomento: Sem financiamento

Vigência: 01/2010 à 01/2019

Resumo: A citoglobina (do Inglês, cytoglobin: Cygb) é uma bis-histidina hexacoordenada hemoproteína da família das globinas cujo papel biológico celular ainda é motivo de discussão, mas tem sido fortemente relacionado aos processos de estresse oxidativo e nitrosativo. Estudos recentes do nosso laboratório (manuscrito em preparação) caracterizaram que o mecanismo de peroxidase citoglobina recombinante de cérebro de rato (rCygb) incubada com HOOH, terc-butil-hidroperóxido (t-BuOOH) e cumeno hidroperóxido (CuOOH) envolve formação do radical tirosila de forma semelhante ao que foi descrito para mioglobina. O radical tirosil foi detectado diretamente por EPR em temperatura de hélio líquido e indiretamente por EPR à temperatura ambiente com uso do captador de spin DBNBS. Embora, tanto a análise da estrutura da proteína quanto os parâmetros de EPR obtidos para os radicais detectados diretamente e captados por DBNBS sejam sugestivos de que a tirosina 59 é o resíduo de aminoácido mais provável de ser a sede da espécie radicalar, não podemos descartar a tirosina 123 e triptofano 171 porque também estão nas proximidades do grupo heme. Sendo assim, a melhor forma de elucidar qual a verdadeira sede do radical livre detectado na proteína é valer-se da técnica de mutação pontual e duplo mutantes visto que o potencial redox muito próximo dos resíduos de tirosina e triptofano possibilita até mesmo que haja compartilhamento do radical livre entre esses aminoácidos aromáticos. Considerando que as mutações podem alterar a estrutura da proteína com repercussões no mecanismo catalítico, vamos associar a essa estratégia investigativa de fazer mutações, a determinação da estrutura cristalográfica dos respectivos mutantes. Estes estudos são relevantes e trazem significativa contribuição, considerando que o mecanismo de peroxidase de Cygb ainda não está bem caracterizado. Esses estudos também abrirão caminho para a continuidade do entendimento da relação estrutura e atividade pereoxidase da Cygb, sendo que além das tirosinas propostas para serem estudadas nesse projeto, no futuro será interessante investigar o papel da histidina 39, sexto ligante do ferro hemínico e que possui potencial para atuar como catalisador ácido-base, após perder a coordenação com o ferro hemínico para o peróxido a ser clivado.

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