Imunoterapia de nova geração – Direcionamento de linfócitos contendo receptores quiméricos para o combate ao câncer e bloqueio do checkpoint imunológico: eficácia terapêutica e estudos moleculares de mecanismos de exaustão de linfócitos.

Nome do Pesquisador: Eloah Rabello Suarez

Agência de fomento: Sem financiamento

Vigência: 01/2018 à 01/2022

Resumo: Linfócitos T (LT) contendo receptores quiméricos constituídos por domínios de ligação de anticorpos (do inglês: CAR, chimeric antigen receptor), capazes de serem diretamente ativados quando em contato com um antígeno específico, são uma nova geração de imunoterapia potente no combate ao câncer, ainda não explorada em pesquisa no Brasil. Resultados extraordinários vêm sendo obtidos no tratamento de tumores hematológicos com essa nova modalidade terapêutica, contudo, alguns desafios precisam ser superados para que a mesma seja eficiente contra tumores sólidos. Entre tais desafios, destaca-se a frequente indução de exaustão dos LT CAR pelo microambiente imunossupressor dos tumores e a migração ineficiente dos LT CAR para os sítios tumorais. Este projeto tem como objetivo produzir LT CAR capazes de migrar com maior eficiência para os sítios tumorais e promoverem bloqueio da exaustão do sistema imune. Tais LT CAR também serão utilizados como modelo de indução/reversão de exaustão para compreendermos a influência de componentes da matriz extracelular na indução da exaustão de linfócitos T, com foco no estudo dos glicosaminoglicanos (GAGs) – heteropolissacarídeos que participam de importantes processos celulares e que podem se comportar como co-receptores durante a estimulação de linfócitos T. A anidrase carbônica IX (CAIX) é um importante antígeno superexpresso em tumores sólidos em hipóxia, principalmente em carcinoma renal de células claras (ccRCC). Neste projeto, um vetor lentiviral bicistrônico de CAR anti-CAIX terá sua estrutura modificada por inserção de um domínio co-estimulatório 4-1BB. Tal domínio vêm demonstrando resultados superiores ao CD28 na manutenção prolongada de diversos tipos de LT CAR in vivo, apresentando menor indução de exaustão. Ainda, o segundo cassete de expressão deste vetor será clonado com o DNA codificante para um anticorpo anti-ligante de morte programada 1 (PD-L1) de alta afinidade ou catepsina X. O anticorpo anti-PD-L1 tem capacidade de bloquear a exaustão dos LT, aperfeiçoando a resposta antitumoral dos LT CAR e de outros LT, enquanto a catepsina X apresenta potencial de aumentar a migração dos LT através do endotélio vascular em direção ao tumor. Os efeitos dos LT CAR serão analisados in vitro em modelos de exaustão de LT e de citotoxicidade de diferentes linhagens de células de ccRCC, atividade da catepsina X e migração dos LT. Os efeitos antitumorais dos LT CAR in vivo serão avaliados em modelo ortotópico de ccRCC, por bioluminescência. Níveis de expressão Ki67 e PD-L1 serão utilizados para avaliação do efeito antitumoral dos LT CAR. A infiltração e a atividade dos LT no tumor serão analisadas por expressão de granzima B e CD3, por imunohistoquímica. Os LT CAR ou as células de ccRCC serão tratadas com inibidores da síntese/sulfatação de GAGs. Os LT tratados ou em contato com células tratadas serão avaliados para marcadores de exaustão, secreção de citocinas e citotoxicidade dos LT contra ccRCC. O perfil dos glicosaminoglicanos nos LT antes e após a indução de exaustão também será avaliado e verificaremos se o bloqueio do checkpoint imunológico pelo anticorpo anti-PD-L1 é capaz de alterar a produção dos GAGs pelos LT e pelas células tumorais, influenciando na malignidade do processo tumoral. Para a realização desse projeto, será necessário o estabelecimento de um laboratório de nível de biossegurança 2 (NB2) multiusuário na UFABC, pois serão utilizados lentivirus recombinantes para a produção dos LT CAR. Este projeto inovador possibilitará a produção de uma nova geração de imunoterapia de grande potencial antitumoral, além de contribuir para a compreensão de mecanismos de controle da exaustão de LT mediados por moléculas da matriz extracelular, permitindo aperfeiçoar o sistema imune como ferramenta no combate ao câncer.

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